液相色谱-串联质谱法检测肝癌细胞N~6-甲基腺嘌呤核苷甲基化水平

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的建立同时测定N6-甲基腺嘌呤核苷（m6A）和腺嘌呤核苷（A）的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）,检测肝癌细胞m6A甲基化水平。方法Hep G2和L02细胞mRNA经分离、消化为核苷,再经含对乙酰氨基酚为内标的甲醇沉淀处理。色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C18柱,流动相为0.1 g/dl甲酸水-甲醇（82∶18）,流速0.4 ml/min,柱温为30℃。质谱检测模式为多反应监测（DMRM）模式,测定m6A和A的浓度,计算细胞m6A甲基化水平。结果建立的LC-MS/MS法检测m6A和A的浓度分别在0.15～50.00 ng/ml和1.50～500.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好（r>0.999）,日内、日间精密度均小于15.00%,准确度为93.67%～101.10%,回收率为91.46%～97.60%,基质效应为90.26%～99.27%,样品稳定性良好。HepG2和L02细胞m6A甲基化水平分别为（0.73±0.11）%和（1.26±0.22）%。结论该方法准确、快速、稳定和灵敏,可用于检测肝癌细胞m6A甲基化水平。

【关键词】 液相色谱-串联质谱 N~6-甲基腺嘌呤核苷甲基化 肝癌细胞

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